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UV, 소독제, 화학물질 접촉 등 피부에 각질을 유발하는 다른 요인이 없었다면 면역부전마우스에서 병원성을 일으키는 Corynebacterium bovis 감염을 의심할 수 있습니다. 병변이 있는 피부나 인후두에서 채취한 검체로 PCR 검사를 진행하거나, 배양 후 MALDI-TOF MS, API Kit Test, 16S rRNA Sequencing을 통해 확진할 수 있습니다. 전염성이 강하고 근절하기 어려운 세균이므로 감염된 동물의 실험 지속 여부에 대해서는 반드시 기관과 상의하시기 바랍니다.

그림 1. Corynebacterium bovis에 감염된 누드 마우스

(출처: Hedrich H. The Laboratory Mouse. 2nd ed. Academic Press; 2012:486.)

제브라피쉬 시스템의 물고기를 건강하게 유지하는 것은 매우 중요한 조건입니다. 하루 중 아픈 물고기를 치료할 수 있는 경우가 여러 번 있습니다. 먹이를 주고, 청소하고, 탱크 또는 장비를 조립하는 동안 또는 어항에 있을 때마다 비정상적인 물고기를 발견하는 경우, 아픈 물고기의 위치를 표시하여 가능한 한 빨리 제거할 수 있도록 합니다.

개체군에서 아픈 물고기를 제거하는 것이 병원체 및 불리한 환경 조건을 감지하고 질병 확산을 예방하는 가장 효과적인 방법입니다. 아래 표와 같이 비정상/병든 물고기의 징후를 확인하고 치료가 가능한 물고기는 깨끗하고 건조된 그물을 이용하여 새로운 탱크에 옮겨 격리한 후 치료과정을 진행합니다. 죽은 물고기는 다른 물고기에 의해 빠르게 잡아먹혀 질병 전염의 중요한 원인이 되므로 발견 즉시 제거합니다. 
 

현재 어류 시스템에서 발견되는 감염을 유발하는 원인으로 제브라피시 종에 고유한  P. neurophilia 라는 미포자충문(Microsporidia)에 속하는 포자를 형성하는 단세포 기생충 감염이 있습니다. P. neurophilia 감염은 어류 성체 중추신경계(CNS)에서 흔히 관찰되며, 이 기생충으로 인한 질병은 양성영향부터 쇠약, 골격 기형, 심지어 사망에 이르기까지 광범위한 증상을 나타낼 수 있습니다. 가장 큰 문제는 감염 초기 단계에서 보여주는 증상이 없어 초기대응이 불가능하여 집단 발병을 일으키고 어류 시설에 심각한 위생 문제를 일으킬 수 있으나 감염을 없애기 위한 효과적인 치료법은 아직 개발되지 않았습니다.  따라서 제브라피쉬 시스템의 기생충 감염여부를 초기에 진단할 수 있는 검사법을 구축하는 것이 필요합니다. 

기생충에 의한 감염은 배아의 경우 수정 후 12~120 시간 내에 감지가 되기도 하며 성체의 경우 척수, 신경 및 전뇌, 망막상피세포 등의 다양한 조직에서 발견됩니다.  

그림 1. 제브라피쉬 배아(a) 및 성체(b)에서 기생충 Pseudoloma neurophilia에 의해 감염되는 조직 

* 그림출처: Caballero-Huertas M et al. Rev Aquac. 2021;13:1816-1827.

제브라피쉬의 배아 및 뇌와 척수를 해부하여 Proteinase K 처리 후 PCR을 진행합니다. 

표 1. P. neurophilia 진단을 위한 Primer

P. neurophilia 감염여부를 확인하기 위한 PCR 조건은 아래와 같고 감염이 되었을 경우, PNA의 primer를 사용하였을 경우 441bp의 밴드를 확인할 수 있습니다. 

표 2. P. neurophilia  진단을 위한 PCR cycle

외부에서 새로운 제브라피쉬의 알을 제공받았을 때나 라인을 유지할 알을 받았을 경우, 혹시 모를 감염에 대비한 어류 개체군 내에서 병원균의 전파 위험을 최소화하기 위한 방법을 구축하는 것이 중요합니다. 

1) 배아를 28.5℃의 온도에 적응시킵니다. 표백을 진행하는 배아는 24~30hpf 단계가 가장 적합하며 부화를 시작하는 경우에는 표백해서는 안됩니다. 
2) 표백을 진행할 테이블 및 기구를 70% alcohol로 소독합니다. 
3) 표백 전 죽거나 수정이 안된 알을 제거한 후 (매우 중요함),  load solution(적재용액 : 0.1% methylene blue in 0.5X embryo media (E2))이 들어있는 1번 통에 배아를 넣어줍니다. 
4) Bleach solution(표백용액 : 0.59ml sodium hypochlorite, chemical grade bleach를 1L의 RO water에 섞어주며 매번 사용 직전에 만듭니다)에 배아를 옮겨 10분 동안 표백합니다. 이 때 배아가 움직이면 상할 가능성이 높으므로 움직임을 최소화하도록 합니다.

5) 배아를 중화용액(1g의 sodium thiosulfate를 0.5X E2 embryo medium 2L에 녹여줍니다.)에 옮겨 1초동안 저어줍니다. 
6) Pronase solution(0.68ml pronase stock solution을 500ml embryo media에 섞어줍니다.)에 옮겨 1분동안 저어줍니다. 
7) 배아를 load solution(적재용액 : 0.1% methylene blue in 0.5X embryo media (E2))에 옮겨 충분히 헹궈줍니다. 
8) 새로운 페트리접시에 배아를 옮겨 배양합니다. 

전체 유전자 이름은 소문자 이탤릭체로, 유전자 기호는 3개 이상의 소문자로 역시 이탤릭체로 표시합니다. 문자는 다른 명명된 제브라피시 돌연변이 및 유전자와 관련하여 고유해야 합니다. 유전자 기호는 확립된 이종성이 있는 경우를 제외하고는 마우스 또는 인간의 유전자 약어와 동일해서는 안 됩니다. 여기서 유전자 기호는 이종형의 기호와 일치해야 합니다. 

Zebrafish 유전자 지정에는 d, dr, z 또는 zf와 같은 종에 대한 언급이 포함되어서는 안 됩니다. 유전자 이름이나 기호에 마침표, 하이픈 등의 구두점을 사용하는 것은 권장되지 않습니다. 유전자 이름은 ZFIN에 등록되어야 합니다. 적절한 명명법에 대한 질문이나 조언이 필요하면 nomenclature@zfin.org 에 문의합니다.

유전자는 가능할 때마다 포유류의 상동체 이름을 따서 명명되어야 합니다. 포유류의 상동체가 알려진 경우에는 모든 문자를 이탤릭체와 소문자로 표시하는 것을 제외하고 동일한 이름과 약어를 사용해야 합니다. 유전자 계열의 구성원은 순차적으로 번호가 매겨집니다.
 

예) 이름: engrailed 1a, engrailed 2b ,  기호: eng1a, eng2b

단백질 기호는 유전자 기호와 동일하지만 이탤릭체가 아니고 첫 글자가 대문자입니다. 제브라피시와 포유류 명명 규칙에 차이가 있으니 주의합니다.  

제브라피쉬의 치어부터 성체까지 영양분이 풍부하여 면역력을 높여주고 치어 탈락률을 낮춰주는 방법 중 하나가 브라인 쉬림프를 살아있는 상태로 급여하는 것입니다. 특히 브라인 쉬림프 이외 이물질이 포함되기 힘들어 전염병의 위험에서 안전하고 소화가 잘 되어 소화불량에 걸릴 일도 없기 때문에 갓 태어난 브라인 쉬림프가 가장 좋은 먹이입니다. 제브라피쉬를 대규모의 사육시스템에서 키우는 경우, 브라인 쉬림프도 대형 배양기를 사용하여 키우게 되나 소규모의 배양 시스템을 갖추고 있는 경우 장소나 인력의 문제로 대규모의 배양시스템을 연속해서 사용하기 힘든 경우가 많아 살아있는 브라인 쉬림프를 급여하기 어려운 경우가 있습니다. 따라서 작은 규모의 실험실을 위한 소규모 배양방법을 소개하고자 합니다. 
 

1. 하비알테미아 브리더 (주광성의 알테미아의 성질을 활용한 부화기)

빛을 향해 열심히 헤엄치는 성질이 있는 알테미아들이 부화가 되면 격벽을 유영하면서 빛이 있는 곳으로 모이게 되고 껍질이 분리된 채 가운데의 뜰채 망 안으로 기어들어 오는 부화기로 적은 수의 배아를 키울 때 유용합니다. 

2. 알테미아 블렌더

2리터의 부화기(ZISS 알테미아 블렌더)로 물 1L : 천일염 30g : 소다 1g의 비율로 소금물을 만들어주고 알테미아를 약 3g 정도 넣어준 후 28~30℃에서 24~30시간 기포기를 넣어서 부화시킵니다. 부화된 브라인 쉬림프는 갓 태어났을 때 0.4mm 정도의 크기이므로 0.1~0.2mm 사이의 거름망을 사용해서 걸러준 후 염분 제거를 위해 몇 번 헹구어 낸 후  급여하거나 냉동하여 보관합니다.