다양한 방법으로 같은 나이의 예쁜꼬마선충을 준비할 수 있습니다. 여기서는 크게 3가지 방법을 소개합니다. L1단계에서 나이를 맞추는 방법 2가지와 같은 시점에 낳은 알들로 준비하는 방법 1가지 입니다.
1) L1단계에서 나이를 맞추는 방법
- 준비물: Bleach 용액 (0.5~1M NaOH, 1.6~3% NaClO (가정용표백제가 약 8% 지만 제품별로 확인)
(1) 많은 선충을 얻는 방법 (2000 마리 이상)
- NGM 배지 위에 있는 어른 선충들을 M9 용액을 이용하여 15ml 튜브나 50ml 튜브로 옮겨 닮는다.
- 원심분리기에서 1300g로 1분 돌려 선충들을 바닥에 가라 앉히고, 튜브 안의 용액을 Bleach 용액 5ml로 바꿔준다.
- 1분마다 튜브를 휘저으며 선충들이 녹아 알이 빠져나오는 정도를 확인한다. 약 5분 정도면 대부분의 알이 몸에서 빠져 나온다.
- 원심분리기에서 1300g로 1분 돌려 알들을 바닥에 가라 앉히고, 튜브 안의 용액을 M9 용액 10ml로 바꿔준다. 이 과정을 3번 반복한다.
- 이 튜브를 쉐이커나 로터에 올려 알들을 지속적으로 섞이도록 하며 대부분의 알이 부화할 때까지 기다린다.
- 배양 온도에 따라 부화에 걸리는 시간이 달라지는데, 예를 들어 20°C에서는 20~24시간 정도 기다리게 된다.
- 나이가 같은 L1들을 동시에 OP50가 있는 NGM으로 옮겨 키우면 된다.
(2) 소수의 선충으로 충분할 때 (50 마리 정도)
- OP50가 없는 NGM 배지에 Bleach 용액 2~10μl를 떨어뜨린다.
- 10마리 이상의 알을 밴 어른 선충들을 집어 Bleach 용액 속으로 넣어준다. 용액이 빨리 마르므로 서두른다.
- 필요에 따라 배지의 다른 위치에 똑같은 과정을 반복하여 총 20마리 이상의 어른 선충들을 용해시킬 수도 있다.
- 배양 온도에 따라 충분히 기다리면 알에서 부화한 L1들을 발견할 수 있고, 이들을 동시에 OP50가 있는 NGM으로 옮겨 키운다.
2) 같은 시점에서 낳은 알로 나이를 맞추는 방법 (소수의 선충으로 충분할 때, 50마리 정도)
- OP50가 있는 NGM 배지에 20~30마리의 알을 밴 어른 선충들을 옮겨 놓고 30분간 알을 낳도록 한다.
- 충분한 수의 알을 낳은 것을 확인하고 모든 어른 선충들을 제거한다. 원하는 배양 조건에서 계속 배양한다.
- 손이 많이 가지만 Bleach 용액을 쓰지 않고도 같은 나이의 선충들을 준비할 수 있다.
